转染 (Transfection): 是借助一定手段人工引入外源核酸 (DNA 或 RNA) 进入细胞的过程。转染目的: 是特异性增强或抑制转染细胞中外源基因表达。
转染的分类
转染类型: 根据在宿主细胞表达时间长短，分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染中，外源基因没有整合到基因组上，仅存在于游离载体，短时间内可获得基因表达产物。稳定转染中，外源基因整合到了基因组，可长期稳定地获得目的蛋白。
图 1. 瞬时转染和稳定转染[1]
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由于阳离子聚合物法操作简单，转染效率高，一般是科研用户的常客。所以小 M 给大家介绍细胞转染过程中，阳离子聚合物转染的原理和操作步骤。
阳离子聚合物法
图 2. 阳离子聚合物法转染原理[2]
转染试剂与外源核酸形成阳离子聚合物，胞吞到细胞，最终导致基因产物“蛋白”的产生
优点: 与其他方法相比，对多种常用细胞具有高水平转染效率；对原代细胞和难转染细胞也具有较好的效果；高效低毒、操作简便、重复性好。
操作步骤
1. 使用完全生长培养基将细胞按照一定细胞密度，铺板于 96 孔细胞培养皿中，100 μL/well，于 37℃，5% CO2 细胞培养箱中，过夜贴壁生长；
2. 当细胞密度达到 70-90% 时，吸去原培养基，并加入无菌 PBS 缓冲液洗涤 2 次 (贴壁性较差的细胞，可省略此步骤)。加入无血清培养基 80 μL/well；
3. 96 孔板通常转染 0.25 μg/20 μL/well DNA 进行转染。根据 DNA (μg)：转染试剂 (μL)= 1：3 比例制备转染试剂/ DNA 无血清培养基复合物，轻轻混匀，室温静置 15 min。
具体每孔转染试剂、DNA 及培养基用量如下表所示：
图 2. 转染步骤及转染效率检测
采用 MCE PolyFast 转染试剂 (HY-K1014)，将外源基因瞬时转染到细胞。转染 24-48 小时，通过荧光实验评价转染效率。结果显示：在 293T 细胞中，RFP 阳性细胞比例高达 95%；在 BHK-21 细胞中，与竞品公司转染试剂比较，MCE PolyFast 转染试剂存在明显优势。Tips: 在荧光实验过程中，可以适当加入抗荧光淬灭剂 (HY-K1042)，缓解各种荧光染料的荧光淬灭，辅助转染效率的荧光检测。
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相关产品 |
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是一种以非脂质体阳离子聚合物为主要成分的高效转染试剂。 |
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是一种不含荧光探针的封固剂，可用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。 |
参考文献
[1] Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future[J].Anal Bioanal Chem. 2010 , 397(8):3173-8.
[2] Fus-Kujawa A, Prus P, Bajdak-Rusinek K, Teper P, Gawron K, Kowalczuk A, Sieron AL.An Overview of Methods and Tools for Transfection of Eukaryotic Cells in vitro[J].Front Bioeng Biotechnol. 2021 , 9:701031.